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TECHNOLOGY PLATFORM
技術(shù)平臺(tái)
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高通量測(cè)序
原理：新一代測(cè)序的技術(shù)原理是采用可逆性末端邊合成邊測(cè)序反應(yīng),首先在 DNA片段兩端加上 序列已知的通用接頭構(gòu)建文庫(kù),文庫(kù)加載到測(cè)序芯片F(xiàn)1owcell上,文庫(kù)兩端的已知序列與F1owcell 基底上的oligo序列互補(bǔ),每條文庫(kù)片段都經(jīng)過(guò)橋式PCR擴(kuò)增形成一個(gè)簇,測(cè)序時(shí)采用邊合成邊測(cè)序反應(yīng), 即在堿基延伸過(guò)程中,每個(gè)循環(huán)反應(yīng)只能延伸一個(gè)正確互補(bǔ)的堿基,根據(jù)四種不同的熒光信號(hào)確認(rèn)堿 基種類,保證最終的核酸序列質(zhì)量,經(jīng)過(guò)多個(gè)循環(huán)后,完整讀取核酸序列。
儀器：Illumina NextSeq500高通量測(cè)序平臺(tái),不僅具有高通量測(cè)序能力和臺(tái)式測(cè)序儀即載即開(kāi)(load-and-go)的簡(jiǎn) 便性,而且是唯一一個(gè)在人類全基因組測(cè)序中可一次性高覆蓋運(yùn)行的 NGS系統(tǒng)。
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Sanger測(cè)序法
原理：Sanger測(cè)序法的技術(shù)原理是在DNA聚合酶的作用下，將dNTP/ddNTP的混合物加到特異 性引物的末端。產(chǎn)生長(zhǎng)短不等的寡核苷酸鏈，并帶有與四種堿基對(duì)應(yīng)熒光標(biāo)記。當(dāng)帶有熒光標(biāo)記的寡核苷酸鏈 混合物通過(guò)測(cè)序儀毛細(xì)管進(jìn)行電泳分離時(shí)，就能根據(jù)熒光顏色判斷對(duì)應(yīng)堿基，而根據(jù)熒光信號(hào)出現(xiàn)的先后順序， 判斷對(duì)應(yīng)堿基在序列中所處的位置。
儀器：ABI 3500基因分析儀為支持驗(yàn)證和法規(guī)規(guī)范環(huán)境中對(duì)儀器性能的嚴(yán)格要求而設(shè)計(jì)， 同時(shí)保留了生命科學(xué)研究人員心目中Applied Biosystems產(chǎn)品一貫擁有的無(wú)可匹敵的應(yīng)用多功能性。
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熒光定量PCR
原理：PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。 PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈解離成單鏈， 以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②復(fù)性：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互 補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì) 與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程，就可獲得更多的 “半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需1～2分鐘， 1～2小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增 放大幾百萬(wàn)倍。
儀器：Roche LightCycler? 480實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)可以讓你實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)在線的高通量快速熒光定量PCR 循環(huán)，可同時(shí)檢測(cè)96或384孔板樣品。結(jié)果可以通過(guò)PCR循環(huán)過(guò)程中實(shí)時(shí)熒光采集和軟件分析進(jìn)行定量和基因型的分析。 復(fù)雜的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)可以進(jìn)行多重PCR檢測(cè)，并適用于多種檢測(cè)模式。超過(guò)10年的實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)與試劑研發(fā)的豐富經(jīng)驗(yàn)， 凝聚成今日業(yè)界的巔峰之作。
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熒光原位雜交FISH
原理：FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈 核酸進(jìn)行異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直 接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測(cè) 信號(hào)強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn)。
儀器：Leica DM 2500熒光顯微鏡捕獲并結(jié)合多通道熒光圖像，可產(chǎn)生完美的FISH圖像，以實(shí)現(xiàn)文檔處理 和審查；強(qiáng)大的分析軟件可反轉(zhuǎn)對(duì)比染色和疊加探測(cè)來(lái)精確地定位熒光信號(hào)，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
